肠破裂时如果进行腹腔穿刺，大多数情况可以抽出黄色乳糜样液体，如果肠穿孔内容物有较多肠内容物甚至大便时，也有可能抽出粪样物质，甚至伴有异味。在进行肠穿孔诊断过程中，常应用的检查方法是物理检查、实验室检查以及影像学检查。物理检查是常说的望、触、叩、听等检查手段，望诊可以看见患者腹式呼吸完全消失，触诊可以摸到患者腹部明显疼痛，甚至呈木板样坚硬，听诊可以发现患者肠鸣音完全消失，在这种情况下，要考虑患者出现弥漫性腹膜炎。
肠穿孔大多数患者都是以弥漫性腹膜炎的形式表现，这种患者一般会停止排气、排便，随着症状延长，患者体温会逐渐升高，白细胞实验室检查也会明显升高。在一些实验室检查外，还可以通过影像学检查，判断是否出现肠穿孔，尤其是腹部平片、腹部CT等，可以发现在腹腔内出现不明原因的游离气体，这些手段是判断肠穿孔的重要标准。
