KB药敏试验实际上是纸片扩散法的药敏试验，也是现在经常做的手工药敏试验。一般在做的过程中，首先挑取单个菌落，然后制成0.5麦氏的菌悬液，然后把菌悬液涂布到琼脂平板上。同时还会在琼脂平板上贴不同的药敏纸片，药敏纸片上含有抗生素，在这个药敏纸片贴到琼脂平板上之后，药敏纸片上的药物会不断扩散，在离药敏纸片越远的地方，抗生素的浓度越低。所以在抑菌浓度范围之内的细菌应不生长，但是在抑菌浓度范围之外的细菌继续生长。
在琼脂平板上会发现，药敏纸片周围会形成空白圈，即抑菌圈。正常情况下，如果药物对致病菌敏感，抑菌圈就会较大，甚至超过30mm。但是如果该致病菌对于这种抗生素不敏感或者耐药，抑菌圈就会叫小。所以抑菌圈大小和致病菌，对于抗生素的敏感程度呈负相关。
