使用痰液进行结核分枝杆菌培养时，通常根据结核分枝杆菌对强酸如硫酸、强碱如氢氧化钠的稳定性，先去除痰液中的杂菌；再把处理好的标本接种到罗氏培养基上，或专门的分枝杆菌培养瓶，用仪器进行培养。培养瓶保养以后再转入到罗氏培养基通常需要两周才能看到菌落的生长，培养到八周仍未有菌落生长时，检验科医生通常发出阴性的报告。

肺结核是由结核分枝杆菌复合群引起的肺部感染，主要包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、山羊分枝杆菌。近年来多重耐药结核分枝杆菌的报道不断增加，虽然诊断结核的试验、方法发展较快，包括分子生物学检测及γ-干扰素释放试验等，但是痰培养仍然较重要。因为只有培养出病原菌，才能进行药物敏感性试验。由于结核分枝杆菌是生物危害二类病原体，因此需要在加强型的生物安全二级实验室进行实验操作。通常在传染病专科医院开展结核分枝杆菌的培养，而综合性医院不开展这种项目。