肉毒素注射后作用在神经肌肉接头，使神经传导不能启动肌肉收缩，达到去除皱纹的目的。通常在注射后的2-3天即可出现作用，一周后作用比较完善，第一次注射能维持半年左右的时间，随着耐药性的发生，再次注射有效时间会缩短，大概维持3-4个月。

肉毒素起效时间与注射肉毒素的剂量不呈正比关系，过量注射肉毒素会导致表情过于死板。此外，药液扩散到控制范围之外会产生其他副作用，如注射抬头纹、眉间纹时，由于药液过度扩散易引起睁眼困难、提上眼肌麻痹等。