第二、三代试管婴儿区别主要如下：

1、技术环节方面：第二代必须通过显微受精的方式，精选单个精子，注射到单个卵子中构建成胚胎，再进行移植。第三代需从胚胎中取出3-5个细胞进行检测，淘汰异常胚胎，保证获得健康的胎儿；

2、适应症方面：第二代试管婴儿适应症包括严重的少弱精、畸精症或不可逆的梗阻性无精症、生精功能障碍。此外，常规试管婴儿失败的情况下，第二个周期时必须采用第二代试管婴儿技术。第三代试管婴儿技术适应症包括染色体数目或结构异常，夫妇双方皆患有连锁性遗传疾病，如血友病。