OT试验是指用旧结核菌素原液，以生理盐水稀释成1:100、1:1000和1:10000三种不同浓度的溶液，分别装于密闭消毒的瓶内，保存于冰箱中备用。具体的稀释方法为取旧结核菌素0.1ml，加生理盐水至10ml，就是1:100的稀释液。取1:100的稀释液0.1ml，加生理盐水至1ml，就是1:1000的稀释液。取1:1000的稀释液0.1ml，加生理盐水至1ml，就是1:10000的稀释液。OT试验通常第一次需使用1:10000的稀释液，以防止发生严重的皮肤和全身反应。

常规消毒后应将皮试液注射于前臂屈侧的皮内，48-72小时观察结果，如果48小时结果不清，就应以72小时的结果为准。观察结果时需注意局部有无硬结，而不能单独以红晕作为标准。阳性则代表受过结核杆菌的感染，阳性程度与发病与否并不完全对等，因为受到很多因素的影响。反应越强对结核病的诊断的意义越大，尤其对于婴幼儿，但是不能单凭此就诊断活动性结核，还需结合胸部CT、血常规、血沉等其他生化指标，以及患者症状、体征进行综合判断。