长期规律服用替比夫定片治疗可以发生耐药，且耐药率较高。耐药不仅可以使已取得的治疗效果丧失，还可以导致肝脏疾病发生迅速恶化，使疾病进展。由于乙肝病毒高复制率、低保卫性的特点，本身会出现病毒突变，在药物治疗的压力下，病毒会根据药物的作用靶点、药代动力学特点，自身筛选出具有耐药基因和耐药通路的病毒珠进行复制，在经肝内环境适应后，最终有大量的耐药病毒株复制。

目前研究显示，使用替比夫定片治疗52周后，患者耐药率为5%，临床耐药监测主要包括乙肝病毒载量，以及肝脏生化学指标。部分医院也开展耐药基因的检测，为降低患者耐药率，提高患者治疗效果，建议患者初始治疗时，首选耐药屏障较高的恩替卡韦、替诺福韦以及替诺福韦酯，服用该药后及时进行相关病毒学检测，如果发生耐药，要换用其他药物。

研究显示，我国高达40%的乙肝病毒耐药与药物不相关，而与患者的依从性相关。患者长期服用抗病毒药物，缺乏相关知识，近半数患者检测不到乙肝病毒后自行停药，导致患者出现耐药，甚至更严重时出现急性肝衰竭的发生。因此患者在服用抗病药物时，应该规律、按时、长期服用，是否停药应该听从医生的建议。