性激素六项检查的时间取决于检查的目的。性激素六项检查需要医生结合患者的病情，评定具体检查的目的，才能进一步决定抽血时间。
如果事先需要评估卵巢的功能以及性激素六项之间是否匹配，需要在早卵泡期。也就是月经来潮的2-4天抽血，检查的结果更为可靠。如果是要了解卵泡发育是否成熟，快排卵时需要借助测基础体温。在基础体温升高的时候，进行性激素六项的检查。如果是了解黄体的功能，同样需要测定基础体温。在基础体温升高期间的时候，进行性激素六项的检查，结果才能更为可靠。如果是想要测定泌乳素的水平，正确的泌乳素测定方法是早上进食少量的主食，提前半小时到医院安静休息。可以在中午10-11点抽血，泌乳素结果才更可靠。
患者检查前禁止外用激素，检查前3天禁止同房，以保证结果准确性。患者要避免熬夜，保证充足的睡眠，避免身体过度劳累。在进行检查前3天，避免从事重体力劳动，以免导致检查结果不准确。患者饮食以高蛋白清淡饮食为主，禁烟、禁酒。