注射用甲氨蝶呤是一种抗肿瘤药，首先具有广谱的抗肿瘤的活性，可以单独使用，也可以和其它的化疗药物联合使用。作为抗肿瘤治疗，它可以用于乳腺癌、妊娠性绒毛膜癌，也可以用于急性白血病、淋巴瘤。除此之外，注射用甲氨蝶呤还可以用于鞘内注射，可以用于治疗脑膜转移癌。另外，这个药物还可以用于治疗银屑病，适合用于治疗对常规疗法不敏感的严重、顽固性的银屑病。
这个药物主要的有效成分是甲氨蝶呤，甲氨蝶蛉主要的作用机制是竞争性地抑制叶酸还原酶，在DNA合成和细胞复制的过程中叶酸必须被此酶还原成四氢叶酸。甲氨蝶呤抑制了叶酸的还原，并且干扰了组织细胞的复制，从而起到抗肿瘤的效果。总之，注射用甲氨蝶呤主要用于恶性肿瘤的治疗。