维生素D的化验单，是通过测定血液当中25羟维生素D，来反映体内维生素D的营养状态。一般认为25羟维生素D，如果在30-60ng/ml为维生素D充足，在20-30ng/ml之间是维生素D不足。如果小于20ng/ml考虑维生素D缺乏，大于150ng/ml，考虑维生素D过量中毒。
维生素D有两个来源，一个是从食物当中获取，另外就是皮肤表皮经过紫外线照射形成。这两种来源的维生素D都没有活性，需要在体内经过肝肾两个部位装上两把羟，也叫羟基，才能发挥它的作用。首先在肝脏，维生素D第一次羟化变成25羟维生素D，另外在肾脏进而进行第二次羟化，形成具有活性的1,25-二羟维生素D3。
25羟维生素D在血液里面半衰期比较长，比较稳定，因此应用25羟维生素D的检测，来评估人体维生素D的营养状态。维生素D如果缺乏，在儿童可能会引起佝偻病，在年纪大人骨骼骨骺闭合了以后，会出现骨软化。维生素D帮助钙的吸收，补充维生素D最好的方法并不是食物，而是阳光照射到皮肤，因此晒太阳是获得维生素D最好的来源。另外，维生素D除了经典的骨骼健康以外作用，还包括非经典的作用，现在发现维生素D和肿瘤、心脑血管疾病、糖尿病有密切的相关性。