在进行75克葡萄糖耐量试验之前要做好充分的准备。实验前三天每天进食碳水化合物不能少于150克，要保证有正常的体力活动。如果过度的运动或卧床休息，都有可能影响糖耐量检查的结果。如果主食量吃得过少，也有可能造成检查的结果不准确。同时要避免有严重的感染或者创伤，造成应激性的血糖增高。在实验以前开始禁食10-16小时，不能少于八小时，但可以饮水。
早点到医院静静休息片刻，取空腹血标本以后，饮用葡萄糖75克，加入温开水或者矿泉水300毫升，五分钟内饮用完毕。儿童按照体重每公斤1.75克葡萄糖给予葡萄糖服用，总量不要超过75克。
服糖以后30分钟、60分钟、90分钟、120分钟，分别取血标本。如果不适合多次取血，仅需要取服糖以后120分钟的必须标本，血标本应该立即进行血糖的检测。正常人服用葡萄糖以后，血糖会迅速升高，30-60分钟达到高峰。血糖达到高峰以后会迅速地下降，一般在1.5-2小时下降到正常的水平。通过测定葡萄糖耐量试验有助于帮助了解是否有糖代谢的紊乱，如果空腹血糖<6.1mmol/L，
服葡萄糖后两小时<7.8mmol/L，属于糖耐量正常。如果空腹血糖在6.1-7mmol/L之间，服糖以后两小时<7.8mmol/L，考虑为空腹血糖受损。如果空腹血糖<7.0mmol/L，服糖以后血糖两小时在7.8-11.1mmol/L间，考虑糖耐量减低。如果空腹血糖≥7mmol/L，服糖以后两小时血糖≥11.1mmol/L，可以诊断为糖尿病。
