确定是否患有梅毒，可以进行梅毒螺旋体检测。梅毒螺旋体血清检测属于梅毒确证试验，梅毒螺旋体侵入人体之后，在血清中可以出现梅毒螺旋体的抗体，并终身存在，所以如果特异性梅毒螺旋体抗体阳性，就意味着患者现在体内感染了梅毒，可能需要治疗，或者患者过去感染过梅毒，但已经治愈。
如果病人有皮肤损伤病灶时，可以直接从病灶皮肤黏膜损伤处取渗出物，如果在暗视野显微镜下见到活动的梅毒螺旋体也可以确诊。另外在就诊时，医生会对患者的生殖器或身体的其它部位进行详细的检查，以寻找可能由梅毒螺旋体引起的症状和体征来辅助诊断。