性激素六项测定的时间和检测的目的密切相关，如果希望了解的卵巢的功能，或性激素六项之间是否匹配，最好是在早卵泡期，也就是在月经来潮2-4天抽血，这样结果才最可靠。另外，如果希望了解黄体的功能，需要在基础体温升高七天的时候测定性激素六项。
如果希望了解卵泡发育的情况以及是否快排卵，同样需要监测基础体温，在基础体温升高的时候进行性激素六项的检查。泌乳素的测定有要求，应该在上午吃完早点，主要是吃些少量的主食，不要吃过度油腻和高蛋白的饮食，提前半小时到医院，静静的休息，在上午10-11点抽血，这样的结果才最可靠，性激素六项测定最准确的时间根据化验的目的来决定。